慢性肾功效衰竭(CRF)动物模子：物理/化学/生物三大造模要领详解

慢性肾功效衰竭（CRF）是由慢性肾脏病导致肾小球滤过率下降，，，，，并陪同相关代谢杂乱及临床症状的一种综合征。。。。应用动物模子有助于深入熟悉CRF的爆发、生长纪律，，，，，并为防治步伐的研究提供实验依据。。。。近年来，，，，，随着实验研究的一直深入，，，，，CRF实验动物模子的造模要领积累了更多履历，，，，，并获得进一步生长。。。。本文对近年来CRF实验动物模子的建设要领举行了综述，，，，，主要涵盖物理要领、化学要领和生物学要领三大类。。。。

1、物理要领造模

物理要领主要包括肾大部分切除、冷冻加切除和热透加切除等手艺，，，，，通过破损肾组织建设CRF模子。。。。

1.1 肾大部分切除法

肾切除模子历史悠久。。。。早在1952年，，，，，Platt等即通过对大鼠实验5/6肾切除，，，，，乐成建设了CRF动物模子。。。。我国沙朝晖等报道的大鼠5/6肾切除法接纳二期手术：首先对大鼠举行大腿肌内注射麻醉，，，，，于左背侧切口袒露左肾，，，，，剥离肾包膜后切除左肾上下极各1/3组织，，，，，并接纳明胶海绵榨取切面止血。。。。首次手术后7 d举行第二次手术，，，，，摘除右肾。。。。术后90 d模子可稳固进入氮质血症期。。。。王瑞强等接纳弧形切除法切除约2/3肾组织，，，，，主要切除皮质部分，，，，，1周后再完整切除右肾。。。。两次手术共切除约80%的肾组织，，，，，8周后造模乐成。。。。

5/6肾切除法制备的CRF模子切合肾小球高灌注、高滤过及高压力导致肾衰竭的理论。。。。该模子以肾小球肥大和硬化为主要特征，，，，，可体现出与人类肾脏纤维化相似的病理历程，，，，，因此模子与临床较为靠近。。。。研究减轻肾组织高灌注、高滤过及抑制系膜细胞增殖的药物时，，，，，可接纳该模子。。。。别的，，，，，实验举行至8周时，，，，，模子动物可泛起低钙、高磷等一系列肾性骨病改变，，，，，提醒该模子亦可用于肾性骨病研究。。。。

但该模子需举行二期手术，，，，，操作较为重大，，，，，对肾组织切除手艺要求较高，，，，，术中应阻止损伤肾盂，，，，，以防尿液外漏。。。。别的，，，，，该造模要领易引起出血、熏染甚至殒命，，，，，且模子制备周期较长。。。。除5/6肾切除法外，，，，，尚有3/4、6/7、7/10等差别水平的肾切除法。。。。虽然这些模子的生化指标及病理损伤均可体现为慢性肾功效衰竭，，，，，但其稳固性均不如5/6肾切除模子。。。。

1.2 冷冻加切除法

成年康健雄性大鼠，，，，，以腹腔注射戊巴比妥钠麻醉，，，，，左侧背部切口疏散肌层，，，，，袒露出左肾，，，，，剥离肾筋膜，，，，，将已浸入液氮瓶内的冷刀依次对肾脏外侧前、后及上、下极4个部位冷冻，，，，，每处冷冻40s，，，，，复位肾脏，，，，，缝合手术切口，，，，，2周后摘除右肾。。。。术后6～12周泛起稳固的CRF模子。。。。

王刚等报道了接纳大耳白兔，，，，，使用上述要领冷冻45s或60s，，，，，该方术数后4周即可造模乐成。。。。杨鹏等接纳改良的左肾上下极结扎加外侧皮质冷冻加右肾切除法，，，，，虽然血清肌酐（Scr）水平较高，，，，，但8周后动物病死率显着增高。。。。

此模子是针对5/6肾切除模子对切除手艺要求高和易出血、易熏染的弱点而设计的。。。。本模子可通过控制冷冻时间来制备差别病变水平的CRF，，，，，但有研究批注肾冷冻后有自身抗体爆发，，，，，其引起的自身免疫反应亦会导致肾脏病变。。。。另一方面冷冻时间、冷刀安排位置及接触面积巨细均可影响病变，，，，，造成差别，，，，，需追求一个统一标准，，，，，镌汰病变差别。。。。

1.3 热透加切除法

1973年Souhami建设了纯粹透热法模子，，，，，1985年Gibb等在此基础上举行刷新，，，，，提出透热右肾加左肾切除的要领。。。。我国肖炜等报道运用该要领详细操作历程为腹腔麻醉小鼠，，，，，做背右侧切口，，，，，袒露右肾被膜后，，，，，用电灼烧器简朴烧灼肾皮质，，，，，然后用丝线结扎，，，，，切除上、下极，，，，，2周后行左肾所有切除，，，，，模子乐成约需10周。。。。王耀光进一步改良，，，，，从肾的上极最先，，，，，点刺烧灼肾的上下极、前后两面除肾蒂以外的所有皮质部分，，，，，前后2次烧灼的间距约1 mm，，，，，1周后切除右肾。。。。手术10 d后SCr、尿素氮（BUN）均显著升高。。。。

本模子造成大部分肾小球、肾小管组织结构破损，，，，，最终形成肾小球硬化。。。。因其血虚在肾衰后第1周泛起，，，，，第2周可达最低点，，，，，尤其适合CRF血虚的研究。。。。本模子制作要领简朴，，，，，可重复性好，，，，，模子乐成率高，，，，，一样平常可抵达中重度CRF水平。。。。其缺乏之处是电凝面积、深度难掌握，，，，，若灼刺过深则使组织炭化，，，，，BUN波动大，，，，，坏死组织存留体内所致的滋扰因素不可扫除。。。。若透热水平掌握不佳，，，，，亦可导致动物殒命。。。。

2、化学要领造模

化学要领通过给药方法诱导肾损伤，，，，，包括腺嘌呤、阿霉素、柔红霉素、氯化镉和消痔灵等模子。。。。

2.1 腺嘌呤模子

高浓度腺嘌呤在体内通过酶促反应形成2，，，，，8-二羟基腺嘌呤，，，，，沉积在肾小管，，，，，影响氮质化合物的渗透，，，，，导致氮质血症，，，，，最终引起CRF。。。。该造模要领由Yokozawa于1986年首先报道，，，，，现在应用普遍。。。。

耿静按腺嘌呤300mg/（kg·d）对Wistar雄性大鼠灌胃21d，，，，，效果发明SCr、BUN及24h尿卵白定量均显著升高，，，，，肾小管上皮细胞肿胀、坏死、脱落，，，，，间质纤维化，，，，，炎症细胞浸润，，，，，少数小球放弃，，，，，切合人类肾衰竭疾病模子。。。。李根林等[11]以为2.5%腺嘌呤混悬液按250mg/（kg·d）一连灌胃14d后，，，，，再改为隔日给药14d，，，，，Wistar雄性大鼠模子可泛起肾功效中重度损伤，，，，，酸中毒，，，，，切合慢性肾功效不全尿毒症期体现。。。。刘洪彦等报道雄性Wistar大鼠腺嘌呤150mg/（kg·d）灌胃12周可乐成构建具备血虚、高血压、脂代谢及钙磷代谢杂乱多种常见并发症的CRF大鼠模子，，，，，并发明肾功效为不可逆转的慢性希望；；；
；而以腺嘌呤300mg/（kg·d）灌胃的大鼠则泛起急性肾损害的特点，，，，，未泛起CRF常见并发症。。。。

差别的腺嘌呤给药剂量及疗程会导致差别水平的肾功效减退，，，，，泛起差别的并发症，，，，，如临床研究CRF钙磷代谢杂乱、高血压等慢性并发症，，，，，最好腺嘌呤150 mg/（kg·d）灌胃，，，，，并且疗程应较长；；；
；还应注重大鼠品系对实验效果的影响，，，，，差别品系的大鼠可能对腺嘌呤反应差别。。。。别的，，，，，该模子以肾小管破损为主要病变特征，，，，，可运用于对一些恢复肾小管功效的新药的研究。。。。但本模子因剂量加大可造成其他脏器的损害而受到限制，，，，，造模有时需加肾部分切除。。。。

2.2 阿霉素模子

阿霉素可使肾脏近曲小管上皮细胞受损，，，，，基质和膜性细胞器变性，，，，，溶酶体功效超负荷，，，，，细胞核崩解。。。。脱落的小管上皮细胞与管腔内的卵白质组成管型，，，，，梗塞管腔，，，，，引起肾小管内压增高，，，，，最终形成CRF。。。。现在接纳的多是改良阿霉素肾病大鼠模子，，，，，杨维娜等在实验最先第4、18天时划分于SD大鼠尾静脉注射阿霉素4mg/kg，，，，，12周末可见部分肾小球硬化，，，，，肾间质纤维化，，，，，SCr、BUN显着升高，，，，，泛起肾功效衰竭。。。。刘韵璐等较量了二次尾静脉注射阿霉素及单侧肾摘除加术后重复尾静脉注射阿霉素所致大鼠肾病模子，，，，，以为后者临床体现更典范，，，，，稳固性及重复性更好。。。。

本模子病理改变为希望性肾小球肾病，，，，，此模子用于药物的开发及药效学研究，，，，，研究降低肾小管压力，，，，，改善卵白尿、低卵白血症以及减轻肾小管上皮细胞损伤等机制。。。。同时有报道该模子凭证阿霉素注射次数及剂量可造成差别水平的肾脏改变，，，，，临床事情者可凭证自身要求合理选择。。。？？？？？Ｋ剂康桨⒚顾亟锨康亩靖弊饔貌煌萍龅ゴ未蠹亮孔⑸浒⒚顾卦炷，，，，，二次尾静脉注射法动物殒命率低，，，，，轻盈，，，，，能够动态视察从细小病变肾病到局性节段性肾小球硬化的希望历程；；；
；单侧肾摘除加术后重复尾静脉注射法可以进一步镌汰阿霉素的毒副作用，，，，，但可能会因手术意外增添病死率。。。。

2.3 柔红霉素模子

阿霉素为柔红霉素的衍生物，，，，，故该模子制备原理与阿霉素相似。。。。古板要领接纳柔红霉素12mg/（kg·d）给大鼠做尾静脉注射，，，，，4～6周成模。。。。林娜等在此基础上举行刷新，，，，，左侧肾脏切除术后第7、14天划分由尾静脉注射12mg/kg柔红霉素，，，，，后按天天1次灌胃给药，，，，，6周后造模完成。。。。该模子可以泛起肾病综合征体现，，，，，后期可见氮质血症。。。。肾脏病理示肾小球硬化，，，，，肾小管透明变性、萎缩甚至坏死。。。。本模子制作周期较短，，，，，稳固性较好，，，，，也可以视察到自早期的细小病变到后期的局灶阶段性肾小球硬化和慢性肾功效不全。。。。

2.4 氯化镉模子

镉主要经肾脏渗透，，，，，慢性镉中毒时，，，，，镉滞留于肾脏，，，，，损伤肾小管及肾小球，，，，，而成CRF。。。。袁立焕等用含氯化镉1g/kg的混淆饲料喂养小鼠，，，，，效果小鼠肾功效和肾组织损害显着，，，，，并呈举行性加重，，，，，乐成制作了CRF模子。。。。用药15d后，，，，，模子动物SCr、BUN上升，，，，，肾脏病理可见近曲小管上皮细胞变性，，，，，肾间质可见炎症细胞浸润，，，，，肾小球有核细胞数目增多。。。。用药125d后可见部分肾小球纤维化。。。。

2.5 消痔灵模子

章如虹等报道该模子的详细造模要领：腹腔麻醉大鼠，，，，，划分用消痔灵稀释液注入双侧肾脏，，，，，需一次注射完成。。。。从肾脏下极进针至中极偏上极处，，，，，只管朝向肾皮质，，，，，针尖斜面朝向皮质，，，，，注射速率要缓慢（每次至少注射1min），，，，，拔针后碘酒棉球榨取针孔3min以上。。。。术后10周后造模乐成，，，，，SCr及BUN举行性升高。。。。16周时病理检查可见普遍的肾小球纤维化、间质纤维化，，，，，剩余肾小球相互靠拢。。。。消痔灵注射模子轻盈易行，，，，，无熏染，，，，，造模创伤小，，，，，乐成率高，，，，，并可通过控制注射剂量来制作轻、中、重差别水平的CRF模子，，，，，其病理改变切合人类CRF固缩肾的特点，，，，，但该要领所需的注射技木给造模造成难度，，，，，且仍不可阻止坏死组织存留体内所爆发的滋扰因素。。。。

3、生物学要领

本模子在1982年由Border等乐成建设，，，，，因该模子形成原位免疫复合物型肾小球肾炎，，，，，故早期主要运用于肾炎的实验研究。。。。

我国由何立群等首次运用于CRF的研究，，，，，接纳新西兰兔耳缘静脉注射C-BSA及大肠杆菌内毒素做预免疫，，，，，1周后注射C-BSA 25 mg/d，，，，，一连5周，，，，，然后隔日注射C-BSA 25 mg，，，，，再一连5周造模乐成。。。。周宝宽等在此基础上举行刷新，，，，，由耳静脉注射C-BSA 25 mg/d，，，，，第4周起注射剂量增至50 mg/d，，，，，共6周后造模乐成。。。。薛继一律报道，，，，，将C-BSA 25 mg溶于2 mL磷酸盐缓冲液中，，，，，经耳缘静脉逐日注射1次，，，，，一连8周模子建成。。。。

此种要领与物理要领相比，，，，，它能模拟人类疾病的自然发病和病程及转归，，，，，是研究疾病自然生长转归及检测药物疗效的优异实验工具。。。。本实验中，，，，，随着注射时间的延伸和C-BSA在体内的蓄积量逐渐增添，，，，，家兔日渐消瘦、蜷缩弓背、精神萎靡、体毛脱落。。。。肾脏的形态学效果显示，，，，，肾脏体积转变履历了一个先增大后缩小的历程。。。。该模子的制备历程中C-BSA的制备工艺相当主要，，，，，周宝宽等优化了古板的C-BSA制备工艺，，，，，加入硫酸铵增强阳离子化的稳固性，，，，，提高了C-BSA的纯度。。。。

4、CRF动物模子制作注重事项

近年来CRF的动物模子无论从物理、化学、生物学要领，，，，，照旧三者相互连系配合制备，，，，，造模手艺均在一直完善。。。。但现实上，，，，，在每一种动物模子的制作历程中，，，，，动物的种系、模子制作手艺、饲料、饲养要领都会对造模的效果爆发影响。。。。

①种系方面：制作模子时应思量不必种系的敏感性问题，，，，，动物差别，，，，，病理转变也差别。。。。3个月的Wistar明确鼠与PVG/C明确鼠单肾切除后，，，，，肾小球硬化有种系间的差别。。。。

②模子制作手艺方面：物理要领造模时，，，，，操作要熟练，，，，，最好由一人操作，，，，，镌汰误差；；；
；手术时注重避免损伤肾上腺；；；
；切除肾脏最幸亏腹膜外举行，，，，，镌汰熏染概率。。。；；；
；б煸炷Ｊ，，，，，药物对机体其他脏器爆发的影响亦禁止忽视。。。。生物要领造模时需注重；；；
；ざ锒稻猜，，，，，因长时间注射C-BSA会造成静脉损伤甚至硬化。。。。

③饲料方面：CRF与食物有不可支解的关系，，，，，高卵白饮食引起的动物模子卵白尿显着高于正常饮食组，，，，，肾小球的硬化亦较正常饮食组严重。。。。

④饲养要领：在造模的历程中应关注动物房的温度湿度、食物的新鲜度、进食次数等。。。。综观CRF动物模子的多种造模要领，，，，，虽造模手艺在一直完善，，，，，但对动物模子的客观评价仍缺乏。。。。以人类慢性肾衰的分期来界定CRF动物模子有一定局限性，，，，，模子评价指标不统一，，，，，模子泛起肾损害水平经常轻重不等，，，，，模子动物缺乏对肾衰的优异耐受性，，，，，通常实验研究历程中可泛起动物殒命。。。。因此，，，，，进一步探索越发切合人类CRF病理转变特点，，，，，规范动物模子的诊断与疗效标准，，，，，追求统一、稳固、轻盈的动物模子仍将是CRF实验研究中需要解决的主要问题，，，，，而这一问题的希望将推动整个CRF实验研究。。。。