荧光原位杂交（FISH）

荧光原位杂交（FISH）可用于检测细胞内特定的DNA或RNA，，，，从而判断特定基因的表达及定位情形，，，，也可用于检测肿瘤或其他疾病爆发、生长历程中染色体的转变。。。。。

荧光原位杂交手艺简介

FISH（Fluoresence In Situ Hybridization）手艺是20世纪80年月生长起来的一种核酸定位手艺，，，，已在人类基因组研究中获得普遍应用。。。。。使用中期染色体FISH，，，，可举行SCP、Cosmid和YAC的染色体定位以及嵌合克隆的判别；；；使用间期核FISH，，，，可在50 kb区分率下举行基因作图。。。。。随着研究的一直深入，，，，现在已能够开展舒展染色质丝（chromatin fibre）FISH，，，，直接丈量基因长度，，，，从而实现高精度基因作图。。。。。随着FISH手艺的生长，，，，其将在人类及其他物种的基因组研究中施展更大的作用。。。。。

荧光标记的染色体原位杂交手艺提供了一种快速、有用的研究手段，，，，可将DNA片断与真核生物细胞特定的染色体区带对应起来，，，，并实现相关DNA片断的定位剖析。。。。。这是研究DNA序列在染色体上定位的直接要领之一。。。。。

探针标记通常？？？？？山幽闪街只痉椒ǎ

（1）直接标记法：将荧光分子直接标记于探针DNA/RNA上，，，，杂交后可直接在荧鲜明微镜下举行检测。。。。。该要领快速轻盈，，，，但由于杂交信号较弱且无法进一步放大，，，，已往应用较少。。。。。不过，，，，该要领具有配景信号低的优点，，，，近年来已在部分公司的试剂盒中获得应用。。。。。

（2）间接标记法：常用的间接标记法是将类似于半抗原（hapten）的标记分子掺入探针分子中。。。。。常用的标记物包括生物素、地高辛（digoxigenin）、二硝基苯（dinitrophenyl，，，，DNP）、氨基乙酰芴（aminoacetylfluorene，，，，AAF）、汞及磺酸盐（sulfonate）等。。。。。就掺入方法来说，，，，生物素、地高辛等通常以核苷酸衍生物的形式掺入，，，，可接纳切口平移法举行标记。。。。。现在更多的人最先用随机引物法。。。。。用这两种要领标记好的探针巨细在200一500bp规模内，，，，是用于杂交的最佳巨细。。。。。别的，，，，也可在已知序列的两个引物之间接纳PCR法举行扩增，，，，或通过合适载体的RNA转录获得探针。。。。。

1、原理

FISH手艺是一种主要的非放射性原位杂交手艺。。。。。其基来源理是：使用已知核酸序列制备探针，，，，并接纳荧光素直接标记或非放射性物质间接标记的要领，，，，使探针与靶DNA举行杂交；；；随后通过免疫细胞化学要领毗连荧光标记物，，，，最后在荧鲜明微镜下视察杂交信号，，，，从而对标本中的待测核酸举行定性、定量及定位剖析。。。。。

2、实验流程

FISH手艺的基本流程包括：样本制备→探针制备→探针标记→杂交→染色体显带→荧鲜明微镜检测→效果剖析。。。。。

3、特点

原位杂交探针按标记分子类型可分为放射性标记探针和非放射性标记探针。。。。。接纳同位素标记的放射性探针，，，，其优点在于对样品制备要求较低，，，，并且可通过延伸曝光时间增强信号强度，，，，因此迅速度较高。。。。。但其弱点包括：探针稳固性较差、自显影时间较长、放射线散射导致空间区分率较低，，，，以及同位素操作历程较为繁琐等。。。。。

接纳荧光标记系统则可战胜上述缺乏，，，，这就是FISH手艺。。。。。作为一种非放射性检测系统，，，，FISH手艺具有以下优点：

首先，，，，从探针制备和杂交历程来看，，，，生物素及其他标记分子均不具有放射性，，，，因此标记和杂交历程中不保存放射性污染危害，，，，清静性较高。。。。。同时，，，，经生物素或其他标记分子标记后的探针稳固性较好，，，，不受半衰限期制，，，，可恒久生涯。。。。。别的，，，，荧鲜明色时间较短，，，，不像同位素杂交那样需要长时间曝光，，，，且配景信号低、效果清晰，，，，其迅速度也较高。。。。。

另外，，，，FISH手艺还可实现多种颜色的同时显色，，，，这是同位素杂交难以实现的。。。。。多色作图不但可以使染色体分带和探针信号泛起差别颜色并同时视察，，，，还可使用差别荧光划分标记差别探针，，，，以确定各探针在染色体上的相对位置。。。。。

弱点：FISH手艺的杂交效率无法抵达100%，，，，尤其是在使用较短的cDNA探针时，，，，杂交效率会显着下降。。。。。

4、应用

FISH手艺不但可用于已知基因或核酸序列的染色体定位，，，，也可用于未克隆基因、遗传标记以及染色体畸变的研究，，，，在基因定性、定量、定位、整合及表达研究等方面具有主要应用价值。。。。。

I．染色体结构变异与非整倍体的检测：荧光原位杂交简化了染色体结构变异的检测。。。。。使用原位杂交可较量容易地检测有缺失、 附加或替换的染色体。。。。。

II．基因扩增与和缺失检测：FISH手艺具有较高的空间区分率和迅速度，，，，使亲本基因和扩增基因在细胞中的定位剖析成为可能。。。。。同时，，，，FISH手艺还可用于定位转基因植物中外源基因的位置及其拷贝数，，，，该要领已在番茄、烟草、大麦、小麦和黑麦等作物研究中获得乐成。。。。。别的，，，，FISH手艺还可用于检测与遗传性疾病相关的基因缺失。。。。。例如，，，，研究职员已使用该手艺乐成检测出无虹膜症（aniridia，，，，一种有数的遗传性虹膜发育异常疾病！！。。┗颊咧械南喙鼗蛉笔А！！。。

III．着丝粒与端粒研究：FISH 手艺为着丝粒结构研究提供了主要手段。。。。。同时应用 FISH 手艺可直接视察染色体端粒，，，，从而简化染色体核内结构及其功效的研究。。。。。

IV．基因作图：使用FISH手艺可直接检测DNA在染色体上的位置，，，，所获得的定位效果反应的是基因在染色体上的现实物理位置。。。。。由于原位杂交不受位点内变异及位点间拷贝数差别的影响，，，，FISH手艺已成为重复序列和多基因家族基因作图的主要工具。。。。。

V．染色体RNA和基因组进化研究：染色体的主要因素包括DNA和组卵白，，，，除此之外，，，，还含有非组卵白及RNA。。。。。对这些因素在染色体中的漫衍举行准确定位，，，，是研究染色体高级结构及构建染色体模子的主要基础。。。。。FISH手艺为上述研究提供了有用手段，，，，并在染色体RNA漫衍及基因组进化研究中施展主要作用。。。。。

荧光原位杂交手艺主要应用于以下领域：

随着标记手艺、检测试剂及荧光成像手艺的一直生长，，，，染色体FISH的应用规模一连拓展。。。。。特殊是激光共聚焦显微手艺的生长，，，，使核结构的三维重修能够在盘算机辅助下实现。。。。。染色体FISH不但可用于基因定位，，，，还可用于研究基因在细胞核内的空间漫衍及其功效关系。。。。。

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