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新闻资讯

常用卵白表达系统——优弱点、应用领域

2015-07-30
|
会见量:

卵白表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因卵白的一种分子生物学手艺。。

表达系统优点弱点应用领域
大肠杆菌表达系统
Escherichia coli
表达水平高;;
低本钱;;
简朴的作育条件;;
生产迅速;;
可拓展性强;;
转化操作简朴;;
卵白表达可以通过多个参数举行优化;;
容易形成二硫键
卵白折叠性较差(包括细菌卵白);;
易形成容纳体;;
低效的体外折叠可能抵消优势;;
与真核生物差别密码子系统;;
很少的翻译后修饰;;
内毒素
纯化卵白的生产(结构、酶、药物发明);;
药物卵白生产
毕赤酵母表达系统
Pichia pastoris
表达水平高;;
低本钱;;
简朴的作育条件;;
生产迅速;;
可拓展性强;;
渗透卵白或细胞内表达的优异选择;;
卵白渗透高效且允许简朴纯化;;
普遍的翻译后修饰;;
N-端糖基化能力优于酿酒酵母;;
无内毒素
使用甲醇作为诱导剂具有一定危害;;
糖基化仍然差别于哺乳动物细胞
纯化卵白的生产(结构、酶、药物发明)
酿酒酵母表达系统
Saccharaomyces cerevisiae
表达水平较高;;
渗透卵白或细胞表达的优异选择;;
低本钱;;
简朴的作育条件;;
可拓展性强;;
拥有大大都真核生物的翻译后修饰;;
有用的卵白折叠;;
无内毒素;;
比毕赤酵母的表达水平低;;
渗透能力可能低于毕赤酵母;;
糖基化与哺乳动物细胞差别;;
过糖基化;;
N-端糖基链结构具有致敏性
纯化卵白的生产(结构、酶、药物发明);;
药物卵白生产
哺乳动物细胞表达系统较高的表达水平;;
中度的可扩展性;;
细胞的悬浮作育特征可大规模生产;;
有用的卵白折叠;;
适合渗透卵白;;
充分的翻译后修饰;;
无内毒素
作育基腾贵;;
重大的生长条件
纯化卵白的生产(结构、酶、药物发明);;
药物卵白生产;;
基于细胞的研究
杆状病毒浸染后的昆虫细胞
( 杆状病毒-昆虫细胞表达系统)
表达水平高(特殊是细胞内卵白);;
较快的生长速率;;
有用的细胞折叠;;
中度可扩展性;;
普遍的翻译后修饰;;
糖基化与哺乳动物细胞类似;;
相对容易地酶促的去糖基化(关于卵白结构测定有利);;
无内毒素
作育基腾贵;;
需要大宗的病毒;;
亲肽的渗透通路低效;;
糖基化仍然差别于哺乳动物细胞;;
病毒侵染会导致细胞裂解和潜在的表达卵白降解
纯化卵白的生产(结构、酶、药物发明)
瞬时表达系统卵白的快速生产通道转染试剂腾贵;;
需要大宗质粒DNA
稳固细胞系可获得卵白生产细胞株系生产速率缓慢(需要数月),,,,,,特殊是使用选择性克隆的情形下传代历程中表达能力可能下降
无细胞卵白生产卵白的快速生产通道;;
大肠杆菌,,,,,,小麦胚芽,,,,,,昆虫和哺乳动物系统均市售;;
生产量的可控;;
卵白合成条件可控;;
可容易地吸收非氨基酸组分;;
可使用PCR产品作为模版,,,,,,适合于简朴的高通量要领;;
在没有犬科胰岛素的情形下有限的翻译后修饰
量化生产本钱腾贵纯化卵白的生产(结构、酶、药物发明);;
体外表达克隆。;
同位素标记过的核磁共振卵白;;
吸收非自然氨基酸组分
BacMam-介导的瞬时转导卵白的快速生产通道;;
可扩展性强;;
无需纯化所需的大宗质粒DNA;;
非裂解(拜见杆状病毒/昆虫细胞)
许多人体细胞的高效转导;;
病毒需求量大


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